Come includere in paraffina un preparato istologico

tramite: O2O
Difficoltà: difficile
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Introduzione

Prima di procedere al taglio al microtomo, quando si effettuano in laboratorio dei prelievi di campioni istologici, bisogna necessariamente includerli per renderli solidi. Spesso le difficoltà principali sono quelle che derivano dall'inclusione di pezzi con delle bolle d'aria. Esse infatti rischiano di precludere l'integrità delle sezioni. Vediamo, in questa guida, come includere in paraffina un preparato istologico. Siamo certi che non ci vorrà moltissimo tempo per farvi capire come è possibile ottenere una cosa di questo tipo: leggete bene la lista degli occorrenti e seguire scrupolosamente i passi che in questa guida vi stiamo fornendo.

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Occorrente

  • Acido picrico
  • Formalina
  • Acido acetico
  • Etanolo 75%
  • Etanolo assoluto
  • Xilene
  • Paraffina
  • Stufa da inclusioni
  • Becco bunsen
  • Spatolina
  • Pinzette
  • Mascherina
  • Occhiali
  • Camice
  • Guanti in lattice
  • Microscopio
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Una volta effettuato il prelievo, per evitare la degradazione del tessuto, bisogna immergere il campione in una fissativo. Immergiamo il campione istologico in Bouin, una miscela di acido picrico, formalina e acido acetico in rapporto 15:5:1. Per pezzi di circa 3 grammi di tessuto bastano sei ore di immersione. Procediamo adesso con la disidratazione del tessuto: effettuiamo un primo rapido risciacquo per eliminare l'eccesso di Bouin in etanolo al 75%. Procediamo poi con 4 cambi sempre in etanolo al 75% ogni 15 minuti. La disidratazione in questo modo procederà progressivamente ed il tessuto non subirà traumi.

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A questo punto proseguiamo con altri 4 cambi in etanolo assoluto ogni 30 minuti. I tessuti così hanno perso acqua ma non sono ancora pronti per l'immersione in paraffina poiché hanno acquistato alcol il quale non è miscibile con la paraffina (cera). È opportuno quindi procedere con ulteriori 2 passaggi in xilene ogni 15 minuti. Lo xilene essendo miscibile con la paraffina, consentirà poi al tessuto di essere penetrato per bene dalla paraffina liquida. Per pezzi di tessuto molto grande è consigliabile aumentare il tempo di immersione nello xilene ad almeno a 30 minuti per ogni cambio.

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Preventivamente avremo messo a sciogliere della paraffina in una stufa a 62°C, quindi una volta terminato il passaggio xilene possiamo inserire i campioni di tessuto nella stufa in paraffina liquida. E molto importante in questa fase che la paraffina liquida sia assolutamente omogenea e limpida. Effettuiamo questa operazione in due passaggi: mantieniamo dapprima il campione in paraffina liquida per 30 minuti, dopodiché adoperiamo della paraffina liquida nuova e lasciamo i campioni over night. In questa fase sarebbe ideale che la stufa disponesse di un sotto vuoto.

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Consigli

Non dimenticare mai:
  • Vi consigliamo di utilizzare sempre i guantoni in lattice per evitare di entrare a contatto con la soluzione.
  • Un'altra cosa che dovete attenzionare è quello che indossate: munitevi di un camice adatto all'operazione che state compiendo.
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