Come Estrarre Il Dna Dalle Cellule Viventi

tramite: O2O
Difficoltà: media
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Introduzione

Il DNA è una lunga molecola che contiene il "progetto" di un determinato essere vivente, sia esso un vegetale, un animale o anche un microrganismo. Negli organismi superiori, il DNA è contenuto nel nucleo delle cellule, nei mitocondri e nei cloroplasti. Salvo alcune eccezioni come le cellule del sangue dei mammiferi, che sono prive di nucleo. Tutte le cellule di un organismo vivente possiedono una copia di DNA. Le cellule ne utilizzano determinate parti o geni per produrre le proteine di cui hanno bisogno. Nella cellula a riposo, si trova associato a un gran numero di proteine (l’insieme di DNA e proteine prende il nome di cromatina), all'interno del nucleo. Piccole proteine dette istoni, presenti solo nel nucleo delle cellule eucarioti, permettono al DNA di ripiegarsi e di avvolgersi ripetutamente su se stesso. Grazie alla presenza degli istoni, che si trovano organizzati in strutture più complesse dette nucleosomi, le lunghe molecole di DNA si ripiegano molte volte su se stesse, formando un grumo compatto che si trova all'interno del nucleo della cellula. Nei passi a seguire sarà illustrato come estrarre il DNA dalle cellule viventi.

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Occorrente

  • una provetta
  • fazzoletti
  • una bacchetta di plastica
  • etanolo
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Questo lavoro si può articolare in tre momenti fondamentali: preparazione della soluzione per demolire il doppio strato fosfolipidico delle membrane, digestione delle proteine(istoni che avvolgono il DNA formando la cromatina) con il succodi ananas, precipitazione del DNA con l’etanolo, preparazione della soluzione per demolire il doppio strato fosfolipidico delle membrane. Pesare 3 g di cloruro di sodio e metterli nel cilindro graduato da 100 ml. Il cloruro di sodio, dissociato negli ioni Na+ e Cl- agisce sugli istoni. Preparare 10 ml di detergente e versarli nel cilindro con il cloruro di sodio. Il detergente agisce sulle membrane cellulari, del nucleo e della cellula stessa. Aggiungere acqua distillata fino ad un volume di 100 ml. Agitare bene per sciogliere il sale; questa soluzione può essere conservata, ben chiusa.

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Prelevare 3 ml della soluzione ottenuta e trasferirli nella provetta da 20 ml. Aggiungere un ugual volume di etanolo freddo (è sufficiente mettere l'alcool nel freezer per un'ora). Versarlo lungo il bordo della provetta con attenzione in modo da formare uno strato sulla superficie del filtrato. Il DNA che si trova a contatto con l’etanolo precipita richiamando continuamente altro DNA. Sul momento si formano delle bollicine di gas, aspettare che termini il fenomeno. Aquesto punto è possibile osservare nell'interfaccia acqua-alcool una sostanza trasparenteche va via via aumentando: è il DNA. Il DNA che prima si trovava in soluzionenell'acqua ora si trova a contatto con l'etanolo; in questo ambiente il DNA non è solubile.

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Dalla soluzione acquosa dell’estratto cellulare il DNA passa nell'etanolo, in quantità che va via viaaumentando, trascinato verso l'alto da bollicine di gas disciolte nella soluzione. All’osservazione il DNA, precipitato nell'etanolo, appare come una "medusa" trasparente benvisibile ad occhio nudo.

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